质谱仪常见问题及使用经验有哪些

对于岛津、安捷伦、Sciex等常见品牌的二手气质联用仪，二手液质联用仪等，我们来详细谈谈关于质谱仪常见问题及使用经验，希望能够对您有所帮助。

质谱仪常见问题汇总

1、质谱不出峰的可能原因？

答：

1）进样系统与离子源没连接或有漏液

2）六通阀漏液

3）雾化气没开

4）喷雾电压没有

5）离子进入分析器的离子通道堵塞

6）喷雾毛细管堵塞

2、如何根据样品选择离子源？

答：可根据分子量的大小、极性。APCI适合小分子，极性小的化合物；ESI适合分析的分子量范围较大、分子要求带有一定极性。一般先考虑用ESI分析，如果极性实在太小，才想到用APCI。

3、等度还是梯度洗脱如何选择？

答：其实只做一两个化合物，是等度洗脱好，速度快，但也并非越快越好，特别在分析生物样品时，考虑到基质效应，保留因子控制在2-3左右较好。梯度洗脱适合分析多个结构不同的物质，如化合物与代谢产物一同鉴定的时候，比如苷和苷元的一同测定。另外很多做合成化学的分析实验室用的也是一通用的梯度洗脱方法，一个方法搞定大部分样品。一般来说对于组成简单的样品可以采用等度洗脱，而对于那些复杂的样品分离通常需要进行梯度洗脱。

4、气质和液质系统对比

答：除了采用的分离手段不同（气相和液相）外主要的区别在于真空系统和电离方式。气质的真空系统比较简单，只要一个小的机械泵和一个分子涡轮泵就可以了。液质的机械泵要比气质大，需要两个分子涡轮泵。气质的电离方式有电子电离（EI）和化学电离（CI）。液质的电离方式有电喷雾电离（ESI）、大气压化学电离（APCI）和大气压光电离（APPI）。

5、APCI和ESI的不同点？

答：

1）离子产生的方式不同。APCI利用电晕放电离子化，气相离子化。ESI利用离子蒸发，液相离子化。

2）能被分析的化合物类型不同。APCI适合弱极性，小分子化合物，且具有一定的挥发性；ESI 极性化合物和生物大分子。

3）流速不同。ESI一般流速较小，约0.001到0.25 mL/min，APCI 相对较大，约0.2到2 mL/min。

4）多电荷。APCI不能生成一系列多电荷离子，所以不适合分析大分子；ESI 能生成一系列多电荷离子，特别适用于蛋白，多肽类等生物分子。

6、CID和CAD区别？

答：CID（collision-induced dissociation），碰撞诱导解离。通常在真空接口处调节电压发生CID现象，一般是去除溶剂，如果电压增大，也会产生碎片离子。这是yi级质谱的原理。CAD（collision-activated dissociation） 碰撞活化解离。 做二级质谱时，选择的母离子进入Q2后，碰撞活化产生子离子，这个过程称为 CAD。以API3200谱仪为例，CID指的是Q0里面的诱导碰撞的气体，CAD指的是Q3里面的诱导碰撞气体。也就是说，在这里的CID&CAD都是指氮气。

7、氮气发生器该使用吗？

答：氮气发生器的工作原理是分离空气，电解膜的负极侧发生氧化反应，“吃掉"空气中的氧化性气体，在正极侧还原，空气流过电解池后就只剩下氮气和惰性气体。故国内发生器的纯度大多标有“相对含氧量"。氮气的纯度和空气流速、有效分解面的长度、电解电势的强弱都有关系。这种分离方法也决定了氮气的纯度不可能做的很高。加入电解质的作用就是提高水的导电率，使电化学反应能顺利进行。发生器对质谱的影响有一点常常被忽略，就是发生器内的开关电源工作时会对电网电压造成一定的干扰（压缩机的启动和停止也会）。

8、串联质谱如何定量？

答：串联质谱定量时，是以后面产生的碎片峰（子离子）定量。但是这一子离子是由母离子在碰撞室产生的特征性碎片，所以用MRM定量灵敏度会比用SIM定量好很多。建立方法的步骤是：用一定溶度的标准品溶液（1-10 ug/mL）调谐化合物的yi级质谱条件，找到母离子的更佳质谱条件。然后对母离子进行打碎，优化碰撞能量，得到其特征性的子离子。更后利用该质谱条件和该母离子->子离子对进行定量。

9、质量偏差怎么办？

答：质谱的质量数偏了，说明你的仪器该校正了，一般3个月就要校一次机。一般每个厂家都会随机带有校正液。

10、如何更换机械泵油？

答：一般3个月到半年更换一次泵油，可同时停机对仪器进行一次清洗。更换泵油的时候，先开启振气阀5-10分钟，待将泵内沉淀振起后，关闭振气阀，同时关闭电源。打开泵下的泵油排放阀门，放掉旧油。如果泵油已经很脏，则可取少许新油清洗泵后放掉再注入新油。

11、产生碰装室离子交互影响（Collision Cell Cross Talk）的原因及消除？

答：多通道扫描（MRM）时，如果两个离子扫描通道的碎片离子一样（或类似如相差1-2分子量单位），前一个离子通道扫描结束后，碰装室里的离子来不及清除，影响下一个离子通道反应的定量（如果色谱分离*则无此影响）。

可能的消除方法：

1）选择特异的子离子（特别是在用稳定同位素内标时）

2）增加离子通道扫描反应之间的时间间隔（如100 ms→300 ms）

3）可设置额外的“无用的离子扫描通道（dummy MRM）"

12、排除色谱柱流失问题的更佳方法是什么？

答：诊断色谱柱是否存在流失问题的方法是第yi次在方法条件下安装色谱柱时，做一次空白色谱图，然后将近期的运行和空白运行色谱图对比。如果在空白运行中产生了很多峰，则色谱柱性能改变，这可能是由于载气中含有氧气，也可能是由于样品残留。如果有 GC-MS，则低极性色谱柱的典型流失离子（例如 DB/HP-1或5）质/荷比m/z 将为 207、73、281、355 等，大多数为环硅氧烷。

13、谱图为什么只有溶剂峰？

答：可能有以下原因

1）进样针损坏

2）载气流速太低

3）样品浓度太低

4）样品被柱或进样器衬套吸附

14、质谱基线高是什么原因？

答：质谱的基线其实跟液相的紫外检测器和荧光检测器一样，基线高的原因不外乎内部和外部的原因。

1）选择的流动相在质谱的响应比较高，比如水相比较多的时候，噪音比较大些；还有如果盐含量比较大的时候，噪音更大些。

2）检测器的灵敏度越高的时候，噪音应该越高。如果质谱的污染比较严重时，基线肯定比较高。比如离子阱检测器，用得久了，阱中的离子就会增多，一方面降低了质谱的灵敏度，另一方面增加了基线噪音。

3）质谱的基线很多时候还跟你选择的离子宽度有关。比如作选择离子扫描的时候，基线就低些。作选择反应扫描的时候，离子宽度不要选得太宽，太宽噪音就高些。

4）多级质谱一般做二级或三级质谱，基线噪音就低很多。

质谱相关的使用经验

1）不用直接进样（容易污染离子源）。

2）做联用时应分流（缩短分析时间、延长质量分析器寿命）。

3）应使用在线切换阀，将每个样品的前后1－2分钟的流动相切入废液（避免样品中的盐进入质谱。做Sequence时可以把平衡柱子的流动相切入废液）。

4）开始联用前，直接运行质谱数分钟，可以先将温度（毛细管温度和离子源温度（APCI））加热到预设定值。

5）待机时将切换阀置于waste，避免刚开液相时将流动相打入离子源。

6）关机前毛细管的温度先降下来，稳定一段时间后再关闭电源，避免风扇停止转动后毛细管外围的热量向里扩散，容易引起内部线路及电子元器件老化加速。

7）如果用的是钢瓶而且天天做样的话，可将两个钢瓶并联。

8）做定量时注意离子源喷针的具体位置，否则可能会影响标准曲线。

9）如果是负离子检测的话，可以向流动相中加入少量异丙醇。

10）理论上液质联用禁止使用任何不挥发性的缓冲盐。如果需要，尽量使用诸如乙酸氨等挥发性盐，浓度不要超过20mmol/L。对于不挥发性的缓冲盐，如果你的仪器有吹扫捕集的话也可使用，但一定要小心。万不得已也不要用，首先有不挥发盐是得不到好的离子流的，其次盐留在质谱中很难除掉，除非停机清洗，不然一直会影响其他样品的分析。可以找质谱友好的条件来做液质联机，例如色谱条件为20mM磷酸盐的水/乙腈流动相，做液质联机的时候就可以用醋酸铵代替，然后用醋酸调节pH值与磷酸盐的一致即可。除了难挥发的盐，三乙胺、表面活性剂、还有高浓度（>0.5%）的TFA，都对质谱不好，液质联用的流动相中应该避免。

11）需要使用酸的情况下可以用甲酸、乙酸，三氟*酸可以用，但能用甲酸或乙酸时就别用TFA。

12）胺类物质做ESI质谱时要注意进样量要少，因为很容易离子化，不易冲洗干净，会影响后面样品的测定。像三乙胺在液质联用时不能用于调节流动相pH值。若不慎引入三乙胺，在正离子检测时总会出现很强的102峰。

13）酸性物质适合做负离子检测，所以流动相偏碱性较合适，促使其解离，碱性物质适合做正离子检测，流动相中适当的加入酸，促使其形成正离子，流动相中适当加一些醋酸钠（或者醋酸铵），可形成加钠的正离子或者加铵的正离子。